山楂提取物具有抗氧化、清除自由基等作用。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，黃酮和低聚前花青素是山楂提取物的兩類主要活性物質(zhì)。用液相色譜法(HPLC)對其進(jìn)行分析的報(bào)道較多，但是到目前為止尚未見到能同時(shí)分析這些成分的令人滿意的方法。本文建立了一種能同時(shí)分析山楂果實(shí)中這些活性成分的HPLC方法。

　　
　　1實(shí)驗(yàn)部分
　　
　　1．1試驗(yàn)材料
　　
　　表兒茶素、綠原酸，購于Sigma公司；前花青素B2、金絲桃苷、Isoquercitrin，購于日本Funakoshi試劑公司；前花青素B5、C1，以山楂果為原料經(jīng)SephadexLH20柱分離、制備型HPLC精制。其余試劑為分析純。
　　
　　1．2樣品處理方法
　　
　　取山楂果去籽切碎混勻，稱取2g放入研缽中，加甲醇2mL、50％磷酸水溶液100μL，研磨后用甲醇轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中定容，用超聲波振蕩提取l0min，取1mL于4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min，上清液過0.45μm濾膜備用。
　　
　　1．3色譜分析條件
　　
　　液相色譜系統(tǒng)由兩臺(tái)P200Ⅱ高壓恒流泵、UV200Ⅱ紫外．可變波長檢測器以及Echrom98色譜工作站等(大連依利特分析儀器有限公司)組成。色譜柱為HYPERSILBDS分析柱(200mm×4.6mmi．d．，5μm)。流動(dòng)相A：20％(體積分?jǐn)?shù))甲醇水溶液(pH3.2O)，流動(dòng)相B：30％(體積分?jǐn)?shù))乙腈水溶液(pH3.2O)，得線性梯度洗脫程序；流速0.6mL／min；檢測波長280nm；進(jìn)樣量1OμL；以外標(biāo)法定量。
　　
　　2結(jié)果與討論
　　
　　2．1色譜條件的確定
　　
　　山楂果實(shí)中活性物質(zhì)大多為多酚類成分，這些成分的極性差異很大，很難在等度洗脫條件下同時(shí)分離。在乙腈-水體系中弱極性的黃酮類成分保留時(shí)間較長，分離效果較好；而甲醇-水體系對低聚前花青素類極性成分的洗脫能力較強(qiáng)，適于樣品中極性成分的分離。在酸性體系下酚酸成分分離較好，其他酚類成分也需要在酸性條件下進(jìn)行分離，所以把流動(dòng)相pH確定為3.1O～3.2O。綠原酸、兩種黃酮和前花青素類物質(zhì)在280nm處都有較強(qiáng)的信號，故確定檢測波長為280nm。本文采用酸性的甲醇水溶液和乙腈水溶液在優(yōu)化的梯度洗脫程序下洗脫，使山楂的主要活性成分在35min內(nèi)得到了較好的分離。
　　
　　2．2方法評價(jià)
　　
　　在梯度條件下，用綠原酸，表兒茶素，前花青素B2、B5、C1，金絲桃苷和Isoquercitrin標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析，各成分的回歸方程(Y：峰面積；X：含量，μg)和相關(guān)系數(shù)r依次為：Y=1.354 29.93，r=0.9998；Y=1.O54X一3.748，r=0.9998；Y=0.673一22.489，r=0.9997；Y=0.538 4.665．r=0.9999；Y=0.700X一6.614，r=0.9998；Y=2.393 46.250，r=0.9995；Y=2.855一90.520，r=0.9996。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)分別為：2.15％，2.21％，4.57％，2.69％，3.06％，1.44％，1.38％。線性范圍(μg)分別為：0.O689～0.2260，0.0469～0.3350，0.1355～0.3660，0.1250～0.8230，0.1282～0.6510．0.2078～0.9870，0.3275～0.8370。回收率分別為：95.2％，105.8％，103.996，
　　
　　97.7％，96.2％，93.9％和94.O％。方法準(zhǔn)確靈敏，定量可靠。